青椒中还原型维生素C含量的测定整体方案
点击: 次 时间:2018-12-03 16:16
概述
维生素C是维持人体正常生理代谢不可缺少的一类有机化合物，在人体内参与氨基酸和神经传递、胶原蛋白合成，具有降低毛细血管的通透性，刺激凝血功能、增加对感染的抵抗作用等。人体缺少维生素C会引起多种疾病，如坏血病。
然而人体所需的维生素C大多数由新鲜的蔬菜供给，新鲜的青椒中维生素C的含量很高。因此，测定包括青椒在内的新鲜蔬菜中维生素C的含量是营养分析的重要内容。
还原型维生素C的测定方法很多，有荧光分光光度计法、过氧化物酶法、2，6-二氯靛酚法等。由于它较易被空气中的氧所氧化，上述方法存在着各种各样的缺陷。
本应用方案选择钼蓝比色分光光度法，因为磷钼酸铵经还原剂维生素C还原后，可以生成亮蓝色的络合物，通过分光比色可以测定青椒中还原维生素C。本法快速、准确、灵敏度高。
一、实验部分
1.1仪器与试剂
紫外可见分光光度计;
6%的钼酸铵溶液:准确称取钼酸铵 30. 0000g，加适量蒸馏水溶解后定容至 500mL ;
草酸- ED TA溶液:准确称取含结晶水的草酸 6. 5000g， ED TA 0.0600g，充分溶解定容至1000mL ;
偏磷酸-醋酸溶液:溶解20g片状偏磷酸于40mL醋酸中，稀释至500mL ，用滤纸过滤，取滤液备用;
标准V c溶液:准确称取 V c 0. 0500g;用上述配好的草酸- ED TA溶液定容于100mL的容量瓶中，使标准液浓度达到 0. 5m g mL ;
6%的硫酸溶液。
1.2实验方法
准确称取一定量的市售青椒，加入草酸- ED TA溶液，用搅碎机捣碎后移入250mL容量瓶中，定容，过滤，滤液即为待测样品的提取液。吸取上述青椒的提取液 1mL于 25mL的容量瓶中，加入 9. 00mL草酸- ED TA溶液1. 00mL偏磷酸-醋酸溶液和 3. 00mL的硫酸，最后再加入 3.00mL钼酸铵，显色后，以蒸馏水为参比测其吸光度。
二、结果与讨论
2.1最大吸收波长的确定
取一定量的V c 0. 5m g mL标准溶液，采用 1. 2所述的方法进行显色后，在波长 600nm - 1100nm范围内用紫外可见分光光度计进行波长扫描，结果见图 1。
由图 1可见钼蓝的络合物在 839nm处有最大吸收值，本实验选择 839nm为测定波长。
2.2钼酸铵用量的影响
固定硫酸和V c标准溶液的用量，改变钼酸铵的用量，测其吸度。结果见图2。由图2可见随着钼酸铵用量的增大，吸光度也随之增大，在3. 00mL左右吸光，本法选用 3.00mL钼酸铵。
2.3酸度的影响
其他条件固定，改变硫酸的用量，测其吸光度。以硫酸的用量为横坐标，吸光度为纵坐标，做曲线，结果见图3。由图3可见硫酸的体积在4. 00mL以内，吸光度比较稳定，但大于4.00mL后随之减小，超过5.00mL后吸光度骤然下降。所以本实验硫酸的体积选用 3. 00mL.
2.4显色时间的确定
吸取1. 00mL标准溶液V c于25mL容量瓶中，在上述最佳实验条件下进行显色后，在不同的显色条件下测其吸光度，结果表明该体系在草酸- ED TA介质中于室温下13m in后反应达到稳定，本实验选择室温下显色时间为 13m in。
2.5标准曲线的确定
分别吸取 0. 20、0. 40、0. 60、0. 80、1. 00、1. 20mL的标准V c (0. 5m g mL )溶液于 25mL的容量瓶中，分别加入草酸- ED TA 9. 80、9. 60、9. 40、9. 20、9. 00、8. 80mL ，再分别加入 1. 00mL偏磷酸-醋酸溶液，3. 00mL的硫酸溶液和3. 00mL的钼酸铵溶液，显色后测定其吸光度。绘制出以溶液浓度 (C )为横坐标，吸光度 A为纵坐标的标准曲线。通过实验方法测定V c浓度与吸光度之间的标准曲线方程为:A = 13.580C + 0. 002，相关系数 r = 0. 999。V c浓度在 0. 004- 0. 024m g mL范围内服从比耳定律。
2.6样品回收率和变异系数的测定
准确称取市售青椒 176. 7914g，经过处理后配成溶液，用上述方法平行测定 6次。测得吸光度，在标准曲线上查出对应浓度，并从实验结果计算出相对平均偏差，回收率和变异系数，见表 1。
经过计算市售青椒样品中的还原型V c的含量为 0. 2390m g g，回收率为 97. 2%。变异系数为 2.51%。
三、结论
选用钼蓝分光法测定青椒中V c的含量，通过实验确定最大吸收波长，硫酸和.磷钼酸铵的最佳用量和最佳的显色时间，并在最佳条件下测定样品中V c含量，该方法简便、快速、准确。
（内容来源渤海大学学报）
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