液相色谱柱在选择时应该注意什么参数变化

　　液相色谱柱，是一种用于液体色谱分析仪器在选择色谱柱之前，先多了解自己的样品和杂质，他们的类型结构、极性、酸碱性、分子量大小等等。以下内容对色谱柱的参数进行分析。

1、色谱柱尺寸

　　较长的色谱柱组分保留较强，运行时间较长，柱效更高，分离度效果更好。在实际工作中应综合衡量运行时间和柱效，选择长度适宜的色谱柱。例如含量测定、溶出检测对于分离的要求较低，可选用较短的色谱柱，减少运行时间；有关物质一般选择较长的色谱柱，提高分离效果。

　　内径小的色谱柱灵敏度较高，峰型更窄，但是载样量较小。如果载样量满足要求，需要更高更尖锐的峰提高灵敏度，可以选择更小内径。但是如果进样量超过了柱载样量，色谱峰将很大限度变宽。所以应在灵敏度和载样量之间综合衡量。

　　粒径小的色谱柱分离度较好，色谱柱压力更大。如果5μm粒径的色谱柱分离度稍有不足，则同型号3μm色谱柱的分离度一般会提供令人满意的选择性。

　　如果选择较小尺寸的色谱柱，应衡量柱外死体积对柱效的影响，柱外死体积包括连接管线、进样体积、色谱柱接头与色谱柱连接处的空隙等。所以一般超高效液相使用的色谱柱不适用于常规液相仪。小规格色谱柱应该使用同一品牌的仪器，减少连接处空隙引入的死体积。题外话：岛津、安捷伦、waters之间仪器管线接头和色谱柱不匹配，仪器和色谱柱品牌不一致必然引入较大连接空隙，应注意这方面的影响。

2、其他参数

　　高比表面积具有较强的保留能力、柱容量和分离度，低比表面积能更快达到平衡状态，这点在梯度淋洗中很有意义。

　　大孔径的填料可以延长大分子在填料中的滞留时间，达到充分分离，改善峰型。大分子样品一般应选择较大孔径色谱柱，如蛋白质、多肽类。

　　单齿键合色谱柱平衡更快；双齿键合稳定性较好，柱容量较大。

　　碳栽量大保留较强，分离效果较好。反之保留较弱，分离效果较差。

　　封尾(也称封端)柱能减轻碱性组分(阳离子)与硅胶表面残留硅氧负离子作用而引起的色谱峰拖尾现象；对于极性样品经封尾处理与未经封尾处理的色谱柱选择性也不同。一般碱性化合物应选择封尾处理的色谱柱。