怎样解决液相色谱峰保留时间延长或缩短问题？

一、液相色谱峰保留时间延长

1、流速降低

检查并重新设置流速，检查泵是否有气泡，检查泵密封垫是否渗漏，以及单向阀和其它系统渗漏。

2、流动相组成改变

检查系统是否有漏液点，排除系统气泡，补足溶剂瓶，确保梯度系统比例正确，预混合流动相进行等梯度洗脱，流动相组成的问题。

在反相色谱中，保留因子k和流动相中有机相的比例是成指数关系的。通常有机相变化1%，保留时间会变化5%-15%，一般是10%。

pH变化0.1会导致保留时间变化10%，所以要准确的测量pH，并且要校正好pH计，在反相色谱中随着pH的增加，酸性化合物保留时间缩短，而碱性化合物延长。

离子对试剂的浓度会影响离子型化合物组分的保留时间。带有和离子对试剂相反电荷的分析物的保留时间会缩短，带同样电荷的会延长。

正相色谱的保留时间对流动相中的极性成分非常敏感，任何情况下水都是一个麻烦，使用半饱和水的非极性溶剂比如正己烷和二氯甲烷来避免这个问题。

3、键合相流失

对于常用硅胶型色谱柱，要保持流动相pH2~8之间。对于极高pH（>10）或极低pH（<2）的工作，使用高稳定性固定相，聚合物或高稳定性固定相柱。

4、硅胶填料的活化位点

使用流动相改性剂;流动相中加竞争碱;固定相用更高覆盖度的填充料。

5、温度降低

控制柱温，通常温度每变化1℃保留时间变化1%-2%。一般情况下影响没有那么大，显然这种问题用柱温箱就可以避免。

二、液相色谱峰保留时间缩短

1、色谱柱填料的活性位点

使用流动相改性剂，竞争碱（碱性化合物，如三乙胺）或增加缓冲液强度，使用高覆盖率的柱填料。

2、流动相组成改变

检查系统是否有漏液点；排除系统气泡；补足溶剂瓶；确保梯度系统比例正确；预混合流动相进行等梯度洗脱。

3、样品过载

减少样品量或使用较大内径或更长的色谱柱。

4、键合相或硅胶基流失

使用温和pH的流动相；使用耐受高pH或低pH专用硅胶柱，聚合物柱或其它高/低pH柱。

5、 色谱柱老化

使用保护柱，或高稳定性键合相聚合物、混合型或高稳定性柱。

（内容参考仪器信息网）