凯氏定氮仪测定蛋白质常见问题解答

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凯氏定氮仪可以测定蛋白质含量，其原理是蛋白质是有机化合物，把含蛋白质的有机化合物样品与浓硫酸与催化剂放入试管中一同加热消化，可以使蛋白质分解，分解的铵根离子与硫酸根离子结合生成硫酸铵，然后在碱性蒸馏作用下使氨气游离，游离的氨气与水蒸汽一起经过冷凝管冷却后，进入装有硼酸的滴定杯中。被硼酸吸收后在用已知浓度的盐酸滴定液进行滴定，然后根据酸的消耗量乘以转换系数，即得到蛋白质含量。下面主要介绍在测定过程中常见的一些问题。

1、全自动凯氏定氮仪测定蛋白质怎样才能消化完全？

要控制样品称样量在合理范围。原则上样品越少越容易消化，但样品量太少计量的误差会变大，所以要控制称取的样品量使其含氮量在30mg~40mg是比较合理的。

消化剂的添加要足够。比如在硫酸不足的情况下，过多的硫酸钾会形成硫酸氢钾而不与氨作用，因此当硫酸过多被消耗或样品中脂肪含量过高时，可适度增加硫酸的量。

2、自动凯氏定氮法中指示剂甲基红和溴甲酚绿是1:5的配比，配比稍有变化影响大吗？

国标中给的两种指示剂，其中B指示剂的配比是甲基红乙醇溶液与溴甲酚绿乙醇溶液的配比为1:5。指示剂的比例不同，颜色会有变化，对结果影响不大，主要配合试剂空白的颜色反应来看反应结果。

3、自动凯氏定氮仪和凯氏定氮仪是不是用的氢氧化钠溶液浓度不一样？

一样的，都是使用400g/L的氢氧化钠溶液。

4、当测定的样品是液体时，也是称取质量吗？

样品取体积还是称质量要看执行标准中的限量单位，如果限量单位是体积则取体积，是质量则称质量。

5、测定液体时称样量能不能减少到5g？

主要看样品的蛋白质含量，控制称取的样品含氮量在30mg~40mg是比较合理的。

6、玉米淀粉的称样量是多少？

玉米淀粉中蛋白质含量很低，滴定法更适用于蛋白质含量为常量的样品，不适合这种微量样品的检测。

7、消化过程中硫酸铜、硫酸钾加多加少有影响吗？

催化剂的添加量要求不是特别严格，其添加量稍有偏差对结果的影响不大，但不要过多或过少。

8、蒸馏过程中，火力控制在多大？

能保证液体沸腾，且产生的蒸汽充足、均匀即可。

9、蒸馏过程中，总是倒流怎么办？

要保证蒸馏装置不漏气，使用前进行装置的检漏。

蒸馏时，要保证蒸汽均匀、充足，中间不能停止加热或减小火力，防止产生倒吸。

蒸馏完毕后先将冷凝管下端提离页面，蒸馏1分钟后取下接收瓶，最后关掉热源，否则可能会发生倒吸。

10、蒸馏过程中，反应液为什么跑到反应室外层？

当热源不够稳定，提供的蒸汽不均匀时会导致此现象的产生。比如停火或者加热的温度降低时，由于反应室外层的压力突然降低，可使液体吸入反应室外层，所以操作时一定要保证加热产生的蒸汽充足、均匀。

11、加了指示剂的硼酸可以保存多久？

混合指示剂需要临用现配，不建议长期保存。

12、含乳饮料的蛋白质折算系数用哪个？

含乳饮料的蛋白质折算系数要看饮料中的蛋白质来源，如果来源仅为纯乳或纯乳制品，则蛋白质用6.38。如果饮料中蛋白质来源较多用6.25。

13、蛋白质测定偏低的原因？蛋白质的称样量过多会导致蛋白质偏低吗？

导致蛋白质测定偏低的原因较多：样品消化不完全、装置漏气导致氨的溢出、操作不当、称样量不合理等均会导致结果偏低。

称样量过多会造成结果偏低。主要还是要看样品，提前预估蛋白质含量，从而掌握合理的称样量。一般控制蛋白质含量在0.2g左右，加入0.4g硫酸铜、6g硫酸钾及20mL浓硫酸是比较合理的消化方法。

14、怎么验证蛋白质测定的准确性？

检查精密度，平行样的绝对差值不超过算数平均值的10%。也可以通过仪器比对、人员比对、留样再测、加标回收等方式验证结果的准确性。