液相色谱仪分析时如何选择合适的色谱柱

液相色谱柱有不同的长度、内径和类型等，我们在做色谱分析时应如何进行选择呢？

1、色谱柱的长度和内径

对于色谱柱的长度和内径，可以基于我们需要分析物质的复杂程度来选择。两支同样填料的色谱柱，柱长越短，分离时间越快，分辨率会更好，同时压力也将更大，可结合样品的复杂性和希望分离的时间来选择合适的柱长。对于色谱柱的内径，窄径柱可提高柱的灵敏度，并可明显降低溶剂的使用量。宽径柱可以将系统死体积的影响降到最低，载样量高，抗污染。

想用不同内径和长度的柱子来进行色谱方法转移，该怎么调整色谱条件呢？对不同内径和长度的色谱柱，我们可以使用以下方法来转换进样量和流速：

2、苯基柱，氰基柱的适用情况

苯基柱可用于含苯环的芳香族化合物的测定，具有较高的选择性。氰基柱/CN柱可作为一个保留能力最弱的反相柱使用，也可作为一个活性降低的正相柱使用。

3、要提高分离度时选择色谱柱的方法

多个样品不好分离的时候，该怎么通过选择合适的柱子来提高分离度呢？提高分离度可从三个主要影响因素来考虑：柱效、选择性和保留因子。可通过减小填料粒径和增加柱长提高柱效。选择性和固定相选择以及pH条件有关，通过选择合适的色谱柱和合适的pH，可以提高选择性。保留因子主要与流动相组成和比例有关，其次流动相pH和离子强度影响目标物存在状态，也会影响保留因子。有时候适当延长出峰时间增加保留因子，也可提高分离度。

4、测定多肽选用的色谱柱

分子量不高的多肽一般选用常规C18或C8柱就能测定，也有用离子交换柱、水性柱和HILIC亲水作用柱。若流动相中含有三氯乙酸这类酸性添加剂，建议还是使用耐受低pH的色谱柱。

5、根据样品特点进行选择

（1）样品是极性的且弱酸性的，,可以选择C18在100%酸性水溶液条件下检测，即要选择（2）如果样品极性太强或酸性太强，可以选择CN，NH2，硅胶柱，HILIC(亲水色谱)，也有使用C18+强阴离子对试剂或强阴离子交换色谱柱。

（3）若样品是碱性的，可选择高纯硅胶柱或一些经过修饰的C18柱(如极性嵌入技术或碱去活技术等)，他们都会减少碱性化合物的拖尾，一般会选择中性或偏碱的条件下做，因为这样可增加碱性样品的保留。

（4）如果碱性化合物的极性太强或碱性太强，可以选择宽pH的C18色谱柱在高pH值检测，或者选用HILIC色谱柱、强离子交换柱和C18+强阴离子对试剂或强阴离子交换色谱柱。