食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定应用方案

一、相关标准及方法原理

本方案参考GB 5009.28-2016《食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》中液相色谱法，该法适用于食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定。

样品经水提取，高脂肪样品经正己烷脱脂、高蛋白样品经蛋白沉淀剂沉淀蛋白，采用液相色谱分离、紫外检测器检测，外标法定量。

二、所需仪器和试剂

1、 上海仪电分析LC220高效液相色谱仪，配备紫外检测器；

2、上海仪电分析AS2000自动进样器；

3、色谱柱：C18柱，4.6 mm×250 mm，粒径为5 µm，或其他等效色谱柱；

4、万分之一电子天平；

5、涡旋振荡器；

6、离心机：转速>8000r/min；

7、匀浆机；

8、恒温水浴锅；

9、超声波发生器。

10、1000mg/L苯甲酸、山梨酸、糖精钠水溶液混标；

11、氨水；

12、乙酸锌；

13、无水乙醇；

14、正己烷；

15、甲醇；

16、乙酸铵；

17、甲酸。

三、测定方法

3.1标准系列的制备

3.1.1 苯甲酸、山梨酸和糖精钠（以糖精计）混合标准中间溶液（200mg/L）)：分别准确吸取苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准储备溶液各10.0mL于50mL容量瓶中，用水定容。于4 ℃贮存，保存期为3个月。

3.1.2 苯甲酸、山梨酸和糖精钠（以糖精计）混合标准系列工作溶液：分别准确吸取苯甲酸、山梨酸和糖精钠混合标准中间溶液0mL、0.05mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL和10.0mL，用水定容至10mL，配制成质量浓度分别为 0 mg/L、1.00 mg/L、5.00 mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg/L、50.0mg/L、100mg/L和200mg/L的混合标准系列工作溶液。临用现配。

3.2 样品准备

取多个预包装的饮料、液态奶等均匀样品直接混合；非均匀的液态、半固态样品用组织匀浆机匀浆；固体样品用研磨机充分粉碎并搅拌均匀；奶酪、黄油、巧克力等采用50 ℃~60 ℃加热熔融，并趁热充分搅拌均匀。取其中的200g装入玻璃容器中，密封，液体试样于4 ℃保存，其他试样于-18 ℃保存。

3.3 试样提取

3.3.1 一般性试样

准确称取约2 g（精确到0.001 g）试样于50 mL具塞离心管中，加水约25 mL，涡旋混匀，于50℃水浴超声20min，冷却至室温后加亚铁**钾溶液2mL和乙酸锌溶液2mL，混匀，于8000r/min离心5min，将水相转移至50mL容量瓶中，于残渣中加水20mL，涡旋混匀后超声5min，于8000r/min离心5 min ，将水相转移到同一50 mL容量瓶中，并用水定容至刻度，混匀。取适量上清液过0.22 pm滤膜，待液相色谱测定。

注：碳酸饮料、果酒、果汁、蒸馏酒等测定时可以不加蛋白沉淀剂。

3.3.2 含胶基的果冻 、糖果等试样

准确称取约2 g（精确到0.001 g）试样于50 mL具塞离心管中，加水约25 mL，涡旋混匀，于70℃水浴加热溶解试样，于50℃水浴超声20 min，之后的操作同3.3.1。

3.3.3 油脂、巧克力、奶油、油炸食品等高油脂试样

准确称取约2 g（精确到0.001 g）试样于50 mL具塞离心管中，加正已烷10 mL，于60 ℃水浴加热约5 min，并不时轻摇以溶解脂肪，然后加氨水溶液（1+99）25 mL，乙醇1 mL，涡旋混匀，于50℃水浴超声20 min，冷却至室温后，加亚铁**钾溶液2 mL和乙酸锌溶液2 mL,混匀，于8 000 r/min 离心5 min，弃去有机相，水相转移至50 mL容量瓶中，残渣同3.3.1再提取一次后测定。

3.4 色谱条件

色谱柱：C18（250mm*4.6mm 5μm）或性能相当者

流速：1 mL/min；

柱温：28℃或室温

波长：230 nm；

进样量：10μL

流动相：甲醇+乙酸铵溶液=5+95，注：当存在干扰峰或需要辅助定性时，可以采用加入甲酸的流动相来测定，如流动相：甲醇+甲酸-乙酸铵溶液=8+92

四、实验结果

4.1 标样谱图